紫外可見分光光度計的日常校準與驗證是確保數(shù)據(jù)準確性的關(guān)鍵，主要包括波長校準、吸光度校準、基線校準及性能驗證，具體方法如下：
一、波長校準
使用標準燈：利用汞燈或氘燈的特征發(fā)射譜線（如汞燈的253.7nm、365nm）進行校準。將儀器設定在特定波長，放置校準燈，調(diào)整光路使其通過樣品池，觀察吸收峰并記錄實際波長值，與標準波長對比，偏差超通過儀器內(nèi)置功能或手動調(diào)節(jié)光柵修正。
使用標準濾光片：采用Ho³?摻雜玻璃濾光片，掃描其特征吸收峰（如418nm、450nm），修正波長示值。該方法無需復雜光源切換，但需定期更換濾光片（建議每年1次）。
二、吸光度校準
透射比標準溶液法：
可見區(qū)：使用硫酸銅溶液（CuSO?·5H?O，λ=640nm，A=0.5）。
紫外區(qū)：使用重鉻酸鉀溶液（K?Cr?O?，λ=350nm，A=0.5）。
配制要求：使用分析純試劑與一級容量瓶，溶液保質(zhì)期不超過7天。采用1cm石英比色皿，以空氣為參比，測量前需用參比液潤洗樣品池3次。要求連續(xù)3次測量RSD≤0.3%，否則需重新裝液。
中性濾光片法：當吸光度>1.5AU時，引入中性濾光片組合（如OD=0.5+1.0疊加），通過多點擬合修正Beer定律偏離。
三、基線校準
使用空白溶劑（如蒸餾水）作為參比，測量其吸光度。調(diào)整儀器的基線調(diào)節(jié)裝置，使空白溶劑的吸光度值為零。重復測量幾次，確保基線穩(wěn)定。
四、性能驗證
精度驗證：準備一系列不同濃度的標準溶液，分別測量每個標準溶液的吸光度，計算其平均值和標準偏差，評估儀器的精度。
重復性驗證：使用同一標準溶液，連續(xù)測量多次，計算每次測量的吸光度值，求其平均值和標準偏差，評估儀器的重復性。
線性驗證：準備一系列不同濃度的標準溶液，分別測量每個標準溶液的吸光度，繪制吸光度-濃度曲線，計算曲線的線性相關(guān)系數(shù)，評估儀器的線性。
